Rekombinante Proteinantigene weisen häufig mehrere unterschiedliche Epitope auf, von denen einige Sequenzepitope und andere Strukturepitope sind.Polyklonale Antikörper, die durch Immunisierung von Tieren mit denaturierten Antigenen gewonnen werden, sind Mischungen von Antikörpern, die für einzelne Epitope spezifisch sind, und können allgemein zum Nachweis natürlicher Strukturen oder denaturierter Zielproteine verwendet werden.Ein Nebeneffekt der Verwendung denaturierter Proteine als Immunogene besteht darin, dass denaturierte Proteine tendenziell stärker immunogen sind und bei Tieren eine starke Immunantwort auslösen können.
Das Expressionssystem von Escherichia coli wird üblicherweise für Antigenzwecke gewählt, da es hinsichtlich Zeit und Geld das kostenintensivste System ist.Um die Möglichkeit der Zielproteinexpression und die Bequemlichkeit der Reinigung zu verbessern, wird manchmal nur ein kleines Fragment des Zielproteins, beispielsweise eine bestimmte Domäne, exprimiert.
Die dreidimensionale Struktur von Proteinen
Die spezifische Domäne eines Proteins
Wenn der Zweck der Antikörperpräparation ausschließlich für den Nachweis von WB besteht, ist es wirtschaftlich und schnell, synthetische kleine Peptide als Antigen zu verwenden, es besteht jedoch das Risiko einer schwachen Immunogenität oder Nichtregenizität aufgrund einer ungeeigneten Auswahl des Peptidsegments.Da die Herstellung von Antikörpern einen langen Zeitraum erfordert, werden häufig zwei oder drei verschiedene Peptidsegmente ausgewählt, um Antikörper mithilfe von Polypeptidantigenen herzustellen, um die Erfolgsquote des Experiments sicherzustellen.
Die Reinheit des Polypeptidantigens für die Immunisierung muss mehr als 80 % betragen.Obwohl eine höhere Reinheit theoretisch Antikörper mit besserer Spezifität erhalten kann, produzieren Tiere in der Praxis immer eine große Anzahl unspezifischer Antikörper, wodurch die Vorteile der Antigenreinheit verschleiert werden.
Darüber hinaus muss die Herstellung von Antikörpern aus kleinen Peptiden mit dem entsprechenden Trägerantigen vernetzt werden, um dessen Immunogenität zu erhöhen.Zwei häufige Antigenträger sind KLH und BSA.
Zeitpunkt der Veröffentlichung: 23. März 2023