Als hochpräzisetztes Instrument kann HPLC leicht zu schwierigen kleinen Problemen führen, wenn es bei der Verwendung nicht richtig betrieben wird. Eines der häufigsten Probleme ist das Problem der Säulenkomprimierung. Wie man einen fehlerhaften Chromatographen schnell beheben. Das HPLC -System besteht hauptsächlich aus einer Reservoirflasche, einer Pumpe, einem Injektor, einer Säule, einer Säulentemperaturkammer, einem Detektor und einem Datenverarbeitungssystem. Für das gesamte System sind die Säulen, Pumpen und Detektoren die Schlüsselkomponenten und die Hauptstandorte, die anfällig für Probleme sind.
Der Schlüssel zum Säulendruck ist der Bereich, der bei der Verwendung von HPLC genau aufmerksam ist. Die Stabilität des Säulendrucks hängt eng mit der chromatographischen Spitzenform, der Säuleneffizienz, der Trennungseffizienz und der Retentionszeit zusammen. Die Säulendruckstabilität bedeutet nicht, dass der Druckwert bei einem stabilen Wert stabil ist, sondern dass der Druckschwankungsbereich zwischen 345 kPa oder 50pSI liegt (sobald die Verwendung der Gradientenelution verwendet wird, wenn der Säulendruck stabil ist und sich langsam ändert). Zu hoch oder zu niedrig ist ein Spaltendruckproblem.
Die anfälligsten für HPLC -Fehler und -Lösungen
1, hoher Druck ist das häufigste Problem bei der Verwendung von HPLC. Dies bedeutet einen plötzlichen Druckanstieg. Im Allgemeinen gibt es die folgenden Gründe: (1) Im Allgemeinen ist dies auf der Blockierung der Flusskanal zurückzuführen. Zu diesem Zeitpunkt sollten wir es stückweise untersuchen. A. Schneiden Sie zunächst den Einlass der Vakuumpumpe ab. Zu diesem Zeitpunkt wurde das Pinkrohr mit Flüssigkeit gefüllt, so dass das Pinkrohr kleiner als die Lösungsmittelflasche war, um zu sehen, ob die Flüssigkeit nach Belieben tropfte. Wenn die Flüssigkeit nicht langsam tropft oder langsam tropft, wird der Lösungsmittelfilterkopf blockiert. Behandlung: Einweichen Sie eine halbe Stunde lang 30% iger Salpetersäure und spülen Sie sie mit ultralem Wasser aus. Wenn die Flüssigkeit zufällig tropft, ist der Lösungsmittelfilterkopf normal und wird überprüft. B. Öffnen Sie das Säuberventil so, dass die mobile Phase nicht durch die Säule verläuft. Wenn der Druck nicht signifikant reduziert ist, wird der weiße Kopf des Filters blockiert. Behandlung: Filterte Whiteheads wurden entfernt und eine halbe Stunde lang mit 10% Isopropanol beschallt. Unter der Annahme, dass der Druck unter 100psi sinkt, ist der gefilterte weiße Kopf normal und wird überprüft. C. Entfernen Sie das Ausgangsende der Säule, wenn der Druck nicht abnimmt, wird die Säule blockiert. Behandlung: Wenn es sich um eine Puffersalzblockade handelt, spülen Sie 95% ab, bis der Druck normal ist. Wenn die Obstruktion durch ein stärker konserviertes Material verursacht wird, sollte ein stärkerer Fluss als die vorliegende mobile Phase verwendet werden, um auf den normalen Druck zu eilen. Wenn der langfristige Reinigungsdruck nicht gemäß der obigen Methode abnimmt, kann der Einlass und der Auslass der Säule als im Gegenteil mit dem Instrument verbunden sein und die Spalte mit der mobilen Phase gereinigt werden. Wenn der Säulendruck noch nicht reduziert ist, kann die Säuleneingangs -Siebplatte nur ersetzt werden, aber sobald der Betrieb nicht gut ist, kann es leicht zur Reduzierung des Säuleneffekts führen. Versuchen Sie also, weniger zu verwenden. Bei schwierigen Problemen kann der Säulenersatz berücksichtigt werden.
(2) Falsche Durchflussrateeinstellung: Die korrekte Durchflussrate kann zurückgesetzt werden.
(3) Falsches Durchflussverhältnis: Der Viskositätsindex unterschiedlicher Strömungen ist unterschiedlich, und der entsprechende Systemdruck der Strömung mit höherer Viskosität ist ebenfalls größer. Wenn möglich, können niedrigere Viskositätslösungsmittel ersetzt oder neu eingestellt und vorbereitet werden.
(4) Systemdruck Null Drift: Einstellen Sie die Null des Flüssigpegelsensors.
2, der Druck ist zu niedrig (1) wird normalerweise durch Systemleckage verursacht. Was zu tun ist: Finden Sie jede Verbindung, insbesondere die Schnittstelle an beiden Enden der Säule und ziehen Sie den Leckbereich fest. Entfernen Sie den Pfosten und ziehen Sie den PTFE -Film mit angemessener Kraft fest.
(2) Das Gas tritt in die Pumpe ein, aber der Druck ist normalerweise zu diesem Zeitpunkt instabil, hoch und niedrig. Im Ernst, die Pumpe kann die Flüssigkeit nicht absorbieren. Behandlungsmethode: Öffnen Sie das Reinigungsventil und reinigen Sie mit einer Durchflussrate von 3 ~ 5 ml/min. Wenn nicht, wurden Luftblasen mit einem dedizierten Nadelrohr am Auspuffventil abgesaugt.
(3) Kein mobiler Phasenabfluss: Überprüfen Sie, ob in der Reservoirflasche eine mobile Phase vorhanden ist, ob die Spüle in die mobile Phase eingetaucht ist und ob die Pumpe ausgeführt wird.
(4) Das Referenzventil ist nicht geschlossen: Das Referenzventil ist nach der Verzögerung geschlossen. Es sinkt normalerweise auf 0,1. ~ 0,2 ml/ min nach dem Schließen des Referenzventils.
Zusammenfassung:
In diesem Artikel werden nur häufige Probleme in der Flüssigchromatographie analysiert. Natürlich werden wir in unserer praktischen Anwendung auf weitere andere Probleme stoßen. Bei der Verwerfung sollten wir folgende Prinzipien befolgen: ändern Sie jeweils nur einen Faktor, um die Beziehung zwischen dem hypothetischen Faktor und dem Problem zu bestimmen. Im Allgemeinen sollten wir beim Ersetzen von Teilen für die Fehlerbehebung darauf achten, dass die abgebauten intakten Teile wieder eingerichtet werden, um Abfall zu verhindern. Eine gute Rekordgewohnheit zu bilden, ist der Schlüssel zum Erfolg des Verwerfungsumschlags. Zusammenfassend ist es bei der Verwendung von HPLC wichtig, auf die Vorbehandlung der Stichproben und die ordnungsgemäße Betrieb und Wartung der Geräte zu achten.
Postzeit: 2025-07-02