Da es sich bei der HPLC um ein hochpräzises Instrument handelt, kann es leicht zu kleinen Problemen kommen, wenn sie während des Gebrauchs nicht richtig bedient wird.Eines der häufigsten Probleme ist das Problem der Spaltenkomprimierung.So können Sie einen defekten Chromatographen schnell beheben.Das HPLC-System besteht im Wesentlichen aus einer Vorratsflasche, einer Pumpe, einem Injektor, einer Säule, einer Säulentemperaturkammer, einem Detektor und einem Datenverarbeitungssystem.Für das gesamte System sind die Säulen, Pumpen und Detektoren die Schlüsselkomponenten und die Hauptstellen, an denen Probleme auftreten können.
Der Schlüssel zum Säulendruck ist der Bereich, der bei der Verwendung von HPLC besondere Aufmerksamkeit erfordert.Die Stabilität des Säulendrucks hängt eng mit der Form des chromatographischen Peaks, der Säuleneffizienz, der Trenneffizienz und der Retentionszeit zusammen.Stabilität des Säulendrucks bedeutet nicht, dass der Druckwert stabil auf einem stabilen Wert liegt, sondern vielmehr, dass der Druckschwankungsbereich zwischen 345 kPa und 50 PSI liegt (was die Verwendung einer Gradientenelution ermöglicht, wenn der Säulendruck stabil ist und sich langsam ändert).Ein zu hoher oder zu niedriger Druck ist ein Problem des Säulendrucks.
Am anfälligsten für HPLC-Fehler und -Lösungen
1, hoher Druck ist das häufigste Problem bei der Verwendung von HPLC.Dies bedeutet einen plötzlichen Druckanstieg.Im Allgemeinen gibt es folgende Gründe: (1) Im Allgemeinen ist dies auf eine Verstopfung des Strömungskanals zurückzuführen.An diesem Punkt sollten wir es stückweise untersuchen.A.Schneiden Sie zunächst den Einlass der Vakuumpumpe ab.Zu diesem Zeitpunkt wurde das PEEK-Röhrchen mit Flüssigkeit gefüllt, sodass das PEEK-Röhrchen kleiner als die Lösungsmittelflasche war, um zu sehen, ob die Flüssigkeit nach Belieben tropfte.Wenn die Flüssigkeit nicht oder nur langsam tropft, ist der Lösungsmittelfilterkopf verstopft.Behandlung: Eine halbe Stunde in 30 %iger Salpetersäure einweichen und mit hochreinem Wasser abspülen.Wenn die Flüssigkeit unregelmäßig tropft, ist der Lösungsmittelfilterkopf normal und wird überprüft;B.Öffnen Sie das Spülventil, damit die mobile Phase nicht durch die Säule gelangt. Wenn der Druck nicht wesentlich verringert wird, ist der weiße Filterkopf blockiert.Behandlung: Gefilterte Mitesser wurden entfernt und eine halbe Stunde lang mit 10 % Isopropanol beschallt.Unter der Annahme, dass der Druck unter 100 PSI fällt, ist der gefilterte weiße Kopf normal und wird überprüft;C.Entfernen Sie das Austrittsende der Säule. Wenn der Druck nicht abnimmt, ist die Säule blockiert.Behandlung: Wenn es sich um eine Verstopfung durch Puffersalz handelt, spülen Sie zu 95 %, bis der Druck normal ist.Wenn die Verstopfung durch höher konserviertes Material verursacht wird, sollte ein stärkerer Fluss als die aktuelle mobile Phase verwendet werden, um den Normaldruck zu erreichen.Wenn der Langzeit-Reinigungsdruck gemäß der oben genannten Methode nicht abnimmt, kann davon ausgegangen werden, dass der Ein- und Auslass der Säule im Gegenteil mit dem Instrument verbunden ist, und die Säule kann mit der mobilen Phase gereinigt werden.Wenn zu diesem Zeitpunkt der Säulendruck immer noch nicht reduziert wird, kann die Siebplatte am Säuleneingang nur ausgetauscht werden. Wenn der Betrieb jedoch nicht gut ist, kann es leicht zu einer Verringerung des Säuleneffekts kommen. Versuchen Sie daher, weniger zu verwenden.Bei schwierigen Problemen kann ein Säulenaustausch in Betracht gezogen werden.
(2) Falsche Durchflusseinstellung: Die korrekte Durchflussrate kann zurückgesetzt werden.
(3) Falsches Durchflussverhältnis: Der Viskositätsindex unterschiedlicher Durchflussanteile ist unterschiedlich und der entsprechende Systemdruck des Durchflusses mit höherer Viskosität ist ebenfalls größer.Wenn möglich, können Lösungsmittel mit niedrigerer Viskosität ersetzt oder neu eingestellt und vorbereitet werden.
(4) Nulldrift des Systemdrucks: Passen Sie den Nullpunkt des Flüssigkeitsstandsensors an.
2, der Druck ist zu niedrig (1), wird normalerweise durch Systemlecks verursacht.Was zu tun ist: Suchen Sie jede Verbindung, insbesondere die Schnittstelle an beiden Enden der Säule, und schließen Sie den Leckbereich ab.Entfernen Sie den Pfosten und ziehen Sie die PTFE-Folie mit angemessener Kraft fest bzw. ummanteln Sie sie.
(2) Das Gas tritt in die Pumpe ein, aber der Druck ist zu diesem Zeitpunkt normalerweise instabil, hoch und niedrig.Noch schlimmer ist, dass die Pumpe die Flüssigkeit nicht aufnehmen kann.Behandlungsmethode: Öffnen Sie das Reinigungsventil und reinigen Sie mit einer Durchflussrate von 3–5 ml/min.Wenn nicht, wurden Luftblasen mithilfe eines speziellen Nadelrohrs am Auslassventil abgesaugt.
(3) Kein Abfluss der mobilen Phase: Überprüfen Sie, ob sich eine mobile Phase in der Vorratsflasche befindet, ob das Waschbecken in die mobile Phase eingetaucht ist und ob die Pumpe läuft.
(4) Das Referenzventil ist nicht geschlossen: Das Referenzventil ist nach der Verzögerung geschlossen.Normalerweise sinkt er auf 0,1.~ 0,2 ml/min nach Schließen des Referenzventils.
Zusammenfassung:
In dieser Arbeit werden nur häufige Probleme der Flüssigkeitschromatographie analysiert.Natürlich werden wir in unserer praktischen Anwendung noch auf weitere Probleme stoßen.Bei der Fehlerbehandlung sollten wir die folgenden Grundsätze befolgen: Ändern Sie jeweils nur einen Faktor, um die Beziehung zwischen dem hypothetischen Faktor und dem Problem zu bestimmen.Im Allgemeinen sollten wir beim Austausch von Teilen zur Fehlerbehebung darauf achten, die demontierten intakten Teile wieder an ihren Platz zu bringen, um Verschwendung zu vermeiden;Die Entwicklung einer guten Aufzeichnungsgewohnheit ist der Schlüssel zum Erfolg bei der Fehlerbehandlung.Zusammenfassend lässt sich sagen, dass es bei der Verwendung von HPLC wichtig ist, auf die Probenvorbehandlung sowie den ordnungsgemäßen Betrieb und die Wartung der Geräte zu achten.
Zeitpunkt der Veröffentlichung: 18.09.2023