Die Proteinreinigung ist der Prozess der Trennung von Proteinfraktionen eines spezifischen Zwecks von Geweben, Zellen oder Proteinmischungen. Die Proteinreinigung sollte nicht nur eine starke Reinheit des isolierten Proteins fördern, sondern auch die biologische Aktivität des Proteins aufrechterhalten. Daher ist es notwendig, ein oder mehrere Kombinationsreinigungsschemata nach verschiedenen Proteineigenschaften zu entwerfen. Die Hauptstrategie für die Proteinreinigung besteht darin, die Ähnlichkeiten und Unterschiede zwischen verschiedenen Proteinen zu nutzen. Auf der Grundlage der Ähnlichkeit zwischen Proteinen kann nicht Proteinmaterial entfernt werden, und dann kann das Zielprotein basierend auf den Proteinunterschieden getrennt werden. Insbesondere bei der schnellen Entwicklung der Gentechnik -Technologie, obwohl viele Proteine durch genetische Rekombination exprimiert werden, hängt das Ausmaß der Proteinreinigung direkt mit der Reinheit und Aktivität des Proteins zusammen. Daher bleibt die Proteinreinigung ein wichtiges Thema in der modernen Biotechnologie.
Objektiv
Einerseits sind die Isolierung und Reinigung von Proteinen besonders wichtig für die eingehende Untersuchung der Struktur und Funktion von Proteinen, und andererseits hängen die Trennung und Reinigung von Proteinen auch direkt mit dem Anwendungseffekt von Proteinen zusammen. Daher spielt die Proteinreinigung eine wichtige Rolle bei der Forschung und Anwendung der biologischen Wissenschaft, und die Proteintrennungs- und Reinigungstechnologie ist auch eine Schlüsseltechnologie in der biologischen Branche.
Der Weg
Das Prinzip der Proteinreinigung besteht darin, das Zielprotein mit angemessener Effizienz, Rate, Ertrag und Reinheit zu trennen und gleichzeitig seine biologische Aktivität und chemische Integrität aufrechtzuerhalten. Die Hauptschritte umfassen die Auswahl experimenteller Materialien, Vorbehandlung, Proteinextraktion, Rohproteinklassifizierung, feiner Proteinklassifizierung und Proteinidentifikation.
Der Reinigungsprozess muss darauf achten: 1, um die Auswirkungen auf die Proteinaktivität zu minimieren, z. 2. bei niedriger Temperatur arbeiten; 3. Versuchen Sie, den führenden Proteingehalt in der Probe zu halten.
Klassifizierung von
Die Proteinreinigung kann gemäß der Art der Reinigungsmethode klassifiziert werden:
I. Ausfällungsmethode, einschließlich Salzablagerung, unter Verwendung von Salzionen, um die verfestigte Schicht auf der Oberfläche des Proteins zu zerstören, die hydrophobe Fläche auszusetzen, und dann die Ablagerung, um den Zweck der vorläufigen Reinigung zu erreichen; Die organische Ablagerung unter Verwendung organischer Lösungsmittel zur Reduzierung der Wasseraktivität zerstört den koagulierten Film auf der Proteinoberfläche, was zu Proteinniederschlag führt. Niederschlag ist eine milde Reinigungsmethode, aber die Reinheit ist nicht hoch und kann als primärer Reinigungsprozess verwendet werden.
Zwei, Dialysemethode, einschließlich Dialyse -Beutel- und Ultrafiltrationsmethode. Durch Dialyse und Ultrafiltration können kleine molekulare Verunreinigungen beseitigt und die Proteinlösung ebenfalls ersetzt werden.
3. Chromatographische Methoden umfassen molekulare Siebgelchromatographie, Ionenaustauschchromatographie, Affinitätchromatographie (Metallchelatchelatchelatchelatchromatographie, Protein A/G -Chromatographie, Rezeptorprotein, Substrat usw.), hydrophobe Chromatographie, Reverse -Chromatographie und Hochleistungflüssigkeitchromatographie. Um bessere Ergebnisse zu erzielen, ist häufig eine Kombination von zwei chromatographischen Methoden wie Affinitätschromatographie und Ionenaustauschchromatographie erforderlich.
Zusätzlich zu den oben genannten Methoden gibt es viele andere Reinigungsmethoden, wie z. B. Dichtegradientenzentrifugation, die für die Herstellung von Proteinen mit hoher Purity geeignet sind, jedoch höhere experimentelle Bedingungen erfordern. Proteinkristalle eignen sich für die biologische Strukturanalyse wie X-Transmission.
Postzeit: 2025-07-01